РОЗМНОЖЕННЯ ОРХІДЕЙ НАСІННЯМ ТА IN-VITRO

РОЗМНОЖЕННЯ IN-VITRO

Нашукала на форумах цікавий матеріал про розмноження орхідей!

 

матеріал із сайту: http://orchids.com.ua/forum/viewtopic.php?f=9&t=762&start=10

К вопросу о размножении кусочками цветоносов.

В культуре in vitro используют не только размножение фаликов семенами, но и вот такие методы: Здесь нужна такая же стерильность, как и при посеве.

 

 

В культуре in vitro…Это я видела своими глазами в лаборатории меристемного размножения в ботсаду в Минске:

Это, конечно, просто цветонос.

А вот малютки-цимбы из меристемы. Им уже года по два:

Вот еще меристема:

 

 

Из свежеполученной книги “Орхидеи в культуре” Черевченко Т.М. Кушнир Г.П.

Для получения жизнеспособного потомства проводят перекрестное опыление между клонами одного и того же сорта. При малом количестве растений опыляют в пределах одного соцветия. После опыления, при нормальном росте плодов, остальные цветки соцветия как верхнего, так и нижнего узлов срезают, что способствует усилению притока пластических веществ в развивающийся плод.

Наиболее качественные семена формируются в плодах среднего узла. В связи с этим визуально (через 2-3 недели после завязывания плодов) определяют в среднем узле самый сильный из плодов, который оставляют для созревания, остальные удаляют. Такая операция вполне себя оправдывает, так как формируются семена высокого качества, а растение не очень истощается и цветет на следующий год.

В порядке эксперимента было проведено опыление всех соцветий Cymbidium hybridum (9-11 цветков) и Phalaenopsis amabilis (5-7 цветков). Все опыленные цветки дали плоды, которые росли два-три месяца, а затем постепенно желтели и опадали. на 15 цветоносах до полного созревания не оставалось плодов.

 

По нашим наблюдениям на растении можно оставлять не более трех плодов, однако качество семян при этом будет ниже, чем в том случае, если для вызревания оставлять лишь один плод.

 

Плоды снимают в период появления у их основания желтизны. Они часто растрескиваются при полном пожелтении, семена не удается сохранить, так как они легкие и при появлении щели сразу легко рассыпаются. Посев семя производят из зеленой коробочки, что исключает их стерилизацию. Если возникает необходимость хранения семян, то их содержат в бумажных пакетах в холодильнике при температуре 4-5°С.

 

СЕМЕННОЕ РАЗМНОЖЕНИЕ ОРХИДЕЙ

автор Юртаев С. В.

Копирование материала запрещено!

Поскольку семена орхидей не содержат в себе запасов питательных веществ для развития

зародыша, то и прорасти самостоятельно они не могут.

В природе семена прорастают с помощью микроскопического почвенного гриба, вступая с

которым в симбиоз, получают питательные вещества – сахара, необходимые для роста зародыша.

Семя Bletilla Х 80

 

Посев в домашних условиях можно производить в специальных стерильных боксах, ламинарных шкафах. Но вполне возможно произвести посев над кастрюлей в парах кипящей воды.

Предварительно нужно приготовить питательную среду, на которой впоследствии будут

прорастать семена. Для этой цели использую среду Кнудсона.

Питательные среды

Knudson C мг/л

Ca(NO3)2*4H2O – 1000

(NH4)2SO4 – 500

KH2PO4 – 250

MgSO4*7H2O – 250

FeSO4*7H2O – 25

MnSO4*4H2O – 7,5

Сахароза – 2000

Агар – агар – 17500

рН – 4,8 – 5,2

 

Thomale мг/л

(NH4)2SO4 – 60

KNO3 – 400

Mg(NO3)2*6H2O – 110

NH4NO3 – 370

KH2PO4 – 300

FeSO4*7H2O – 20

Фруктоза – 1000

Глюкоза – 1000

Агар – агар 16000

рН – 4,9 -5,2

 

Fast мг/л

Ca(NO3)2*4H2O – 80

NH4NO3 – 160

KH2PO4 -80

KCl – 160

MgSO4*7H2O -80

Хелат железа – 2,6мл

ZnSO4*7H2O – 1

H3BO3 – 1

MnSO4*4H2O – 0,1

CuSO4*5H2O -0,03

AlCl3 – 0,03

NiCl2*6H2O – 0,03

KI – 0,01

Активированный уголь – 2000

Пептон – 2000

Гумат натрия – 50

Пивные дрожжи – 2000

Сахароза – 12000

Фруктоза – 5000

Агар – агар – 8000

рН – 6,0 – 6,4

 

Murashige & Skoog мг/л

KNO3 – 1900

CaCl2*2H2O – 440

NH4NO3 – 1650

KH2PO4 – 170

MgSO4*7H2O – 370

FeSO4*7H2O – 27,95

Na2 ЭДТА – 37,23

CoCl2*6H2O – 0,025

ZnSO4*7H2O – 8,6

H3BO3 – 6,2

MnSO4*4H2O – 22,3

CuSO4*5H2O – 0,025

Na2MoO4*H2O – 0,25

KI – 0,83

Глицин – 2

Мезоинозит – 100

Никотиновая кислота – 0,5

Тиамин – 0,1

Пиридоксин – 0,5

Сахароза -30000

Агар- агар – 10000

рН -5,7

 

Harvais I A

Ca(NO3)2*4H2O – 400

KNO3 – 200

NH4NO3 – 400

KH2PO4 – 200

KCl – 100

MgSO4*7H2O – 200

Хелат железа – 5 мл

CoCl2*6H2O – 0,02

ZnSO4*7H2O – 0,5

H3BO3 – 0,5

MnSO4*4H2O – 0,5

CuSO4*5H2O – 0,5

Na2MoO4*H2O – 0,04

KI – 0,1

Никотиновая кислота – 5

Тиамин – 5

Пиридоксин – 0,5

Картофельный экстракт – 100 мл

Агар – агар – 10000

рН – 6,0 – 6,4

 

Van Waes & Deberg BM1

KH2PO4 – 240

MgSO4*7H2O -100

FeSO4*7H2O – 27,95

Na2 ЭДТА – 37,23

ZnSO4*7H2O – 10

H3BO3 – 10

MnSO4*4H2O – 25

CuSO4*5H2O – 0,025

Na2MoO4*H2O – 0,25

Глицин – 2

Мезоинозит – 1200

Никотиновая кислота – 5

Тиамин – 0,5

Пиридоксин – 0,5

Фолиевая кислота – 0,5

Биотин -0,05

Гидролизат козеина – 500

L –глютамин – 100

Сахароза – 20000Агар – агар – 6000

рН – 5,8

 

Van Waes & Deberg BM2

KH2PO4 – 240

MgSO4*7H2O -100

FeSO4*7H2O – 27,95

Na2 ЭДТА – 37,23

ZnSO4*7H2O – 10

H3BO3 – 10

MnSO4*4H2O – 25

CuSO4*5H2O – 0,025

Na2MoO4*H2O – 0,25

Глицин – 2

Мезоинозит – 1200

Никотиновая кислота – 5

Тиамин – 0,5

Пиридоксин – 0,5

Фолиевая кислота – 0,5

Биотин – 0,05

Гидролизат козеина – 500

L –глютамин – 100

БАП – 0,2

Сахароза – 20000Агар – агар – 6000

рН – 5,8

 

Как правило всех компонентов среды достать практически не возможно особенно любителям живущим в провинции, а если компоненты заказывать через Интернет вся эта затея с посевом ведет в «копеечку».

А как же быть если очень хочется ?

 

Как показывает жизнь , неразрешимых проблем не бывает! И в скорее, проблема была решена все компоненты среды оказались заменяемы.

 

Замена компонентов среды и средств стерилизации семян на компоненты, легко встречающиеся в быту

 

 

Желательно измерить рН готовой седы, оптимальная для посева эпифитных орхидей в пределах от 4,8 до 5,2

Если рН высокий его можно понизить с помощью добавления по каплям лимонного сока до нужного уровня рН. Если рН низкий его можно повысить с помощью раствора Соды питьевой, добавляя его по каплям до нужного уровня рН.

 

Я использую Среду собственного приготовления.

Удобрение для орхидей Бона форте – 3,3 мл, Сахар – 20 гр, в качестве гелеобразователя использую или крахмал 200 г/л или агар – агар -15 гр, дистилированная вода – 1 л.

рН 4,8 – 5,8

Такая среда является базовой. Её можно модифицировать, изменять, добавляя компоненты. Такие как:

Активированный уголь – затемняет среду, адсорбирует продукты жизнедеятельности растения, такие как фенол токсичный для сеянцев, особенно целесообразно его применять при посеве, если в дальнейшем, не будет возможности, пассировать сеянцы на свежую питательную среду.

Мед – является хорошим антисептиком, биологически активен, препятствует образованию плесени, им заменяют ½ от массы сахара.

Пюре – сок из помидоров (свежее) – нормализует кислотность, обладает биологически активными свойствами заменяют ½ – 1/3 от массы воды.

Бананы зеленые – биологически активная добавка стимулирует рост корней у сеянцев, добавляют 30 – 50 гр.

Кокосовая вода (жидкий эндосперм кокосового ореха) именно вода (прозрачная) а не молоко – биологически активная добавка, способствует образованию вторичных протокормов, ускоряет рост, добавляют 50 – 500 мл/л.

Также используют Ананасовый сок, березовый сок, отвар фасоли и др.

 

Из собственного опыта:

Трудно достать агар, я использовал другой гелеобразователь – Крахмал 100-200г на литр.

Все ингредиенты смешиваются , соли или удобрение отдельно в воде, агар заливают водой для набухания (часть воды входящая в состав среды) затем его разогревают для «плавления» не доводя до кипения и соединяют с остальными компонентами. В случае использования крахмала в раствор с солями (или удобрением), сахаром, с нужным уровнем рН, добавляют крахмал и не доводя до кипения , постоянно помешивая прогревают до загустения, желательно не полного а до состояния жидкой сметаны.

Готовую питательную среду разливают толщиной 2-4 см, в предварительно хорошо промытые, желательно стерилизованные (как на варенье) баночки из под детского питания или другие банки до 500 гр объемом, главное с герметично закручивающимися крышками, закручивают плотно крышкой.

Стерилизация питательной среды

Банки с пит. Средой устанавливают в кастрюлю на решетку (пароварку), наливают холодную воду до такого уровня, чтобы она касалась дна банки. Кастрюлю накрывают крышкой и ставят на огонь, после закипания воды стерилизуют среду минут 30, затем отключают нагрев и остужают банки в кастрюле, эту же операцию (стерилизацию) необходимо повторить еще два раза, с интервалом в сутки. Такая дробная стерилизация, обеспечивает полную стерильность среды.

Среда в банках готова. Она может храниться при комнатной температуре или в холодильнике несколько месяцев.

Посев семян

Существуют два метода посева семян из недозрелого и раскрывшегося плода.

Недозрелый, пожелтевший или начинающий желтеть (не лопнувший) плод, моют с мылом, обтирают 70% спиртом и разрезают над паром, дезинфицированным прокаленным в пламени скальпелем, и сеют над паром рассыпая их на пит. среду.

Раскрытый, треснувший плод, семена из него помещают в стерилизованную посуду заливают гипохлорит натрия 1 % (NaOCl) на 5 – 8 минут (можно купить в мед технике), или я использовал перекись водорода 1,5% – 3 %(у меня получилось) на 10 – 15 минут и сильно трясти. После чего дать семенам осесть, набрать стерильным шприцом семена вместе с стерил. жидкостью и вылить содержимое на среду и закрыть банку, плотно, крышкой предварительно обожженной над пламенем. Также необходимо обжигать края банки. Далее необходимо покачивая в разные стороны банку распределить семена по среде.

 

ВАЖНО

Для обеспечения стерильного посева, производить его над паром.

В домашних условиях это можно сделать так. На широкую кастрюлю устанавливаем железную решетку, наливаем воду и ставим на огонь, вода кипит, образуется пар и восходящий теплый воздух который уносит споры грибков и др. микроорганизмов в верх не давая им попасть в банку. На решетку в центр устанавливается «столик» например из пенопласта, на который можно будет устанавливать банку со средой, стерильные инструменты, и др.

Посев должен осуществляется максимально быстро, все операции проводить над паром, не допускать перегрева семян и среды.

Руки должны быть в стерильных перчатках, можно обрабатывать спиртом.

Стерилизация инструментов – завернуть в фольгу и прокалить в духовке при 150 *С 30 минут.

Обжигание инструментов, крышек – пронос инструмента крышки над пламенем (спиртовки) задержкой на 2 секунды, можно 2 раза. Для обжига крышек пользуйтесь пинцетами и зажимами..

Банки с посевами содержать при температуре 20 – 25 * С при освещении лампами дневного света, на расстоянии 30 см. или при естественном освещении не допуская попадания прямых солнечных лучей.

Если в течении 5 – 7 дней на поверхности пит. среды или в ее толще не образовалось плесень, или до 20 дней слизистые колонии бактерий, то посев произведен чисто.

Если посев был произведен чисто то через 7 – 14 дней семена набухнут, увеличатся в размере, начнут зеленеть.

Phalaenopsis

Через месяц после посева

Список использованной литературы:

Широков А. И., Коломейцева Г. Л., Буров А. В., Каменева Е. В. Культивирование орхидей европейской России. Нижний Новгород, 2005. 64 с.

Joseph Arditti. Micropropagation of Orchids. Second edition. Volume I. University of California, Irvine, 2008 – 1523 с.

Герасимов С. О., Журавлев И. М. Орхидеи. – М.: Росагропромиздат, 1988 – 208 с.: ил.


Через 50 дней

Через 12 месяцев после посева

Если есть интерес, пробуйте, нарабатывайте опыт, при определенной степени настойчивости у вас все получится, не с первого раза так со второго.

Підготувала: Троцька О.С.

Leave a Comment